Описание "Системы индикаторные бумажные (СИБ) для ускоренного определения колититра воды"

Системы индикаторные бумажные (СИБ) для ускоренного определения колититра воды

Бумажные индикаторные системы представляют собой полоски иди диски хроматографической бумаги, пропитанные соответствующими субстратами и индикаторами и покрытые для стабилизации пленкообразующим полимером -–водным раствором поливинилового спирта.

Бумажная индикаторная система с глюкозой представляет собой диск диаметром 0,8- 1,0 см . СИБ для определения оксидазы – в виде полосок размером 8х1 см или дисков диаметром 3,5- 4 см . Срок годности СИБ указан на этикетках (не менее года).

Способ применения .

Постановка оксидазного теста с помощью СИБ-оксидазы при работе бродильным методом. По 2-3 изолированные колонии каждого типа, выросшие на секторах чашки со средой Эндо, снимают петлей и наносят на полоску СИБ-оксидазы (полоску помещают в чашку Петри). При положительной реакции на месте нанесения культуры бумажка синеет в течение одной минуты. При отрицательной – цвет бумажной полоски не изменяется. В ряде случаев оксидазный тест со среды Эндо проявляется недостаточно четко, особенно при исследовании колоний, окрашенных в темно-красный цвет. В таких случаях нужно пересеять колонии со среды Эндо на сектор чашки с питательным агаром или на скошенный питательный агар, и после подращивания при температуре 37 ° С в течение 3-5 часов пробу повторить.

Постановка оксидазного теста с помощью СИБ-оксидазы при работе методом мембранных фильтров .

Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями переносят пинцетом, не переворачивая, на бумажный диск СИБ-оксидазы, диаметром 3,5- 4 см (по наиболее принятому размеру фильтра), который предварительно рекомендуется смочить стерильной дистиллированной водой. Через 3-4 минуты определяют результат. Все посиневшие колонии, а также колонии с синим ободком не относятся к семейству Enterobacteriaceae , их не учитывают. Мембранный фильтр сразу же после четкого проявления реакции переносят обратно на среду Эндо и немедленно (не позднее пяти минут) отсекают оксидазоотрицательные колонии, по 2-3 колонии каждого типа, для определения ферментации глюкозы.

Определение характера ферментации глюкозы.

А) На плотной питательной среде (чашечный метод). В чашку Петри тонким слоем наливают 2 %-ный щелочной агар (рН 7,2-7,8, не ниже 7,2). Подозрительные на кишечную палочку колонии засевают петлей на сектор чашки по периферии. На одной чашке могут быть исследованы 6-8 культур. На место посева (площадью около 0,5 см 2 ) накладывают диск с глюкозой. Для улавливания газообразования и фиксации диска последний заливают несколькими каплями расплавленного и остуженного до 40-45 ° С, полужидкого агара (0,6-0,8%). Инкубируют при температуре 37 ° С. при разложении глюкозы до образования кислоты цвет диска меняется из красного в желтый. При наличии газообразования пузырьки газа скапливаются по краям диска и между диском и агаром. Результаты учитывают в течение 3-5 часов. Скорость реакции зависит от посевной дозы и ферментативной активности культуры. После 5-6 часов начинается подщелачивание среды за счет протеолиза белков, желтая зона вновь розовеет и приобретает первоначальный красный цвет.

В качестве контроля необходимо использовать диск без посева культуры. Красный цвет их не меняется. Различие в цвете контрольных и опытных дисков служит для сравнения при учете реакции.

Б) В жидкой питательной среде (пробирочный метод). В пробирку с предварительно разлитым по 0,3-0,5 мл и подогретым до 37 ° С питательным бульоном (рН 7,4-7,8) вносят петлей колонию изучаемой культуры и погружают диск с глюкозой. Среда в пробирках в результате быстрой диффузии в нее индикатора, импрегнированного в бумаге, становится красной. При ферментации глюкозы через 3-5 часов инкубации в термостате при температуре 37 ° С среда приобретает желтый или оранжевый цвет, а у газообразующих культур на ее поверхности появляются пузырьки газа. Желтый или оранжевый цвет среды, как правило, сохраняется в течение

18-24 часов, пузырьки же газа к этому времени исчезают. В случае необходимости учета результатов на следующий день рекомендуется использовать погружение в среду небольшого клочка гигроскопичной ваты и поплавок. Чем больше засеяно культуры, тем быстрее происходит ферментация глюкозы.

При определении индекса кишечных палочек выявление ферментации глюкозы является решающим, поэтому получение ответа через 4-5 часов вместо 18-24 часов имеет несомненное практическое значение.

Примечание:

1. Исследования проводят с чистой культурой.

2. Аппликацию дисков с глюкозой на чашки или погружение их в пробирки производят обожженным пинцетом.

3. Критерием правильности учета реакций должно быть четкое различие в окраске по сравнению с контролем.

4. При определении активности оксидазы можно использовать тот же сектор чашки, на котором изучается ферментация глюкозы. Дополнительный посев культуры при этом рекомендуется проводить на участке сектора, расположенного ближе к центру чашки.

5. Основные дефекты при применении СИБ с глюкозой зависят: от несоблюдения режима рН; при использовании посуды, обработанной различными порошками и недостаточно отмытой; от несоответствия фактических данных рН физиологического раствора сухих сред с указанными на этикетках и т.п.

6. Для ускоренного получения результатов необходимо соблюдение стабильного температурного режима термостата (37 ° С).

Срок годности СИБ 2 года.