Наборы реагентов Компании Биоком для обнаружения РНК возбудителей инфекционных заболеваний

Описание "Наборы реагентов Компании Биоком для обнаружения РНК возбудителей инфекционных заболеваний"

Наборы реагентов Компании Биоком для обнаружения РНК возбудителей инфекционных заболеваний

Назначение

Наборы реагентов GenePak^TM RNA PCR test предназначены для качественного обнаружения вирусной или другой РНК в плазме или сыворотке крови, соскобе или смыве слизистой, экстрактах фекалий или других проб методом полимеразной цепной реакции, сопряженной с реакцией обратной транскрипции (RT-PCR).

Набор реагентов GenePak^TM RNA PCR test может быть использован в клинической медицине для обнаружения РНК вирусной или другой природы, для оценки эффективности и корректировки проводимой терапии.

Время проводимого анализа после приготовления рабочих растворов составляет около 5 часов.

Набор реагентов рассчитан на проведение 100 реакций, из них 10 для положительных и 10 для отрицательных контрольных образцов.

Принцип действия и аналитические характеристики

Набор реагентов GenePak^TM RNA PCR test основан на использовании двух сопряженных полимеразных реакций: реакции обратной транскрипции на основе вирусной или другой РНК для получения кДНК и полимеразной цепной реакции (PCR) для амплификации полученной кДНК матрицы.

Наборы реагентов GenePak^TM RNA PCR test представляют собой лиофилизованные сухие смеси, готовые для амплификации выделенной РНК.

В наборе реагентов для проведения реакции обратной транскрипции использованы случайный гексануклеотидный праймер, обратная транскриптаза (ММLV-RT) и ингибитор РНКаз (RNAsin), а также использованы пара праймеров и Taq ДНК полимераза для проведения PCR. В качестве матрицы для праймеров и проведения RT-PCR использованы консервативные последовательности геномов вирусов или другой РНК.

Детекцию PCR продукта проводят электрофорезом в агарозном геле, окрашенном бромистым этидием, в УФ-свете с длиной волны 302 нм. По наличию специфического фрагмента амплификации определенного размера судят о присутствии вирусной или другой РНК в анализируемом материале.

Состав набора (на 100 выделений)

• (+) control (положительный контрольный образец), готов к применению - красные пробирки с лиофилизованным сухим содержимым красного цвета, 10 шт.;
• (-) сontrol (отрицательный контрольный образец), готов к применению - синие пробирки с лиофилизованным сухим содержимым красного цвета, 10 шт.;
• (+)RT MasterMix (ОТ МастерМикс), готов к применению - бесцветные пробирки с лиофилизованным сухим содержимым красного цвета для анализа клинических проб, 80 шт;
• (+)PCR MasterMix (ПЦР МастерМикс), готов к применению - бесцветные пробирки с лиофилизованным сухим содержимым синего цвета для анализа клинических проб, 100 шт;
• (+)RT Diluent (ОТ Растворитель), 1 пробирка 0,5 мл;
• (+)PCR Diluent (ПЦР Растворитель), 1 пробирка, 1,5 мл;
• (+)Dinoil^TM (Динойл^TM , масло минеральное), 2 пробирки по 1,0 мл.

Формат пробирок для амплификации - 0,2 или 0,5 мл.

Перечень наборов

Наборы реагентов для количественного определения РНК возбудителей инфекционных заболеваний

Назначение

Наборы реагентов GenePak^TM Quantitative RT-PCR test предназначены для количественного определения РНК возбудителей инфекционных заболеваний в плазме или сыворотке крови, цельной крови, спинномозговой жидкости, лимфе, моче, гомогенатах тканей и других пробах человека методом конкурентной полимеразной цепной реакции (Quantitative-competitive RT-PCR).

Наборы реагентов GenePak^TM Quantitative RT-PCR test могут быть использованы в клинической лаборатории для определения концентрации РНК вирусной или другой природы в пробах человека при ведении мониторинга проводимой терапии.

Время проводимого анализа после приготовления рабочих растворов составляет не более 4 ч.

Наборы рассчитаны на проведение 140 реакций (20 серий по 6 реакций) и предназначены для исследования 20 клинических проб. В комплект набора также входят по 10 пробирок для проведения реакций положительного и отрицательного контролей.

Формат пробирок для амплификации - 0,5 мл.

Принцип действия

Набор реагентов GenePak^TM Quantitative RT-PCR test основан на использовании процесса амплификации РНК методом конкурентной RT-PCR с раститрованным внутренним контролем (конкурентом), имеющим аналогичные сайты отжига для используемых специфических праймеров. PCR продукты от специфической матрицы и внутреннего контроля отличаются на 100 пар нуклеотидов. Реакцию одновременной амплификации специфической матрицы и внутреннего контроля проводят в серии из 6 пробирок с раститрованным от 10² до 10⁷ копий матрицы внутреннего контроля и одинаковым объемом анализируемой пробы с определяемой РНК.

Наборы реагентов GenePak^TM Quantitative RT-PCR test представляют собой лиофилизованные сухие смеси, готовые для амплификации выделенной РНК.

Детекцию PCR продукта проводят электрофорезом в агарозном геле, окрашенном бромистым этидием под УФ светом с длиной волны 310 нм. В конкурентных условиях реакции амплификации количество матрицы в анализируемой пробе определяют относительно известного количества копий внутреннего контроля в каждой пробирке из серии. Регистрацию результатов проводят визуально, с помощью фотографирования или сканирования видеосистемой.

Аналитические характеристики

При использовании в качестве исходного материала нативной или синтезированной in vitro РНК возбудителя (положительный контрольный образец) на агарозном геле после проведения электрофореза продуктов амплификации под УФ-светом выше ряда полос внутреннего контроля (конкурента) должна появиться полоса, соответствующая определенному размеру матрицы (табл. 1).

При использовании в качестве исходного материала бидистиллированной воды или исходного супернатанта ЭкстраГена Е в качестве отрицательного контрольного образца после проведения электрофореза на агарозном геле полоса желтого цвета выше ряда полос внутреенего контроля (конкурента) должна отсутствовать.

Интервал количественного определения матрицы РНК расположен в пределах от 10² до 10⁷ копий в анализируемом объеме 5 мкл.

Состав набора (на 20 проб)

• N1 RT MasterMix (ОТ МастерМикс, содержащий 10² копий положительного внутреннего контроля) -пробирки с лиофолизованным содержимым красного цвета, 20 шт;
• N2 RT MasterMix (ОТ МастерМикс, содержащий 10³ копий положительного внутреннего контроля) - пробирки с лиофилизованным содержимым красного цвета , 20 шт.;
• N3 RT MasterMix (ОТ МастерМикс, содержащий 10⁴ копий положительного внутреннего контроля) - пробирки с лиофилизованным содержимым красного цвета, 20 шт;
• N4 RT MasterMix (ОТ МастерМикс, содержащий 10⁵ копий положительного внутреннего контроля) - пробирки с лиофилизованным содержимым красного цвета, 20 шт;
• N5 RT MasterMix (ОТ МастерМикс, содержащий 10⁶ копий положительного внутреннего контроля) - пробирки с лиофилизованным содержимым красного цвета, 20 шт;
• N6 RT MasterMix (ОТ МастерМикс, содержащий 10⁷ копий положительного внутреннего контроля) - пробирки с лиофилизованным содержимым красного цвета, 20 шт;
• PCR MasterMix (ПЦР МастерМикс), готов к применению - бесцветные пробирки с лиофилизованным сухим содержимым синего цвета для анализа клинических проб, 140 шт;
• (+) control (положительный контрольный образец) - красные пробирки с лиофолизованным сухим содержимым красного цвета, 10 шт.;
• (-) сontrol (отрицательный контрольный образец) - синие пробирки с лиофилизованным сухим содержимым красного цвета, 10 шт.;
• Marker M50 (маркер молекулярной массы М50), зеленые пробирки с лиофилизованным сухим содержимым темно-синего цвета, 10 шт.
• RT Diluent (OT Растворитель), 2 пробирки по 0,5 мл;
• RT-PCR Diluent (OT-ПЦР Растворитель), 2 пробирки по 2,0 мл;
• Dinoil l (Масло для ПЦР), 2 пробирки по 2,0 мл.

Перечень наборов